黄曲霉毒素,具有稳定、耐高温特性,可于长波紫外光下产生荧光,根据荧光颜色、RF值及结构不同等分为B1、B2、G1、G2、M1、M2、P1、R1、GM、毒醇。
AFT难溶于水、乙烷、石油醚,易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙腈和二甲基甲酰胺等有机溶剂。AFT可在PH1~3的酸性溶剂中稍分解,PH9~10溶液中迅速分解破坏,遇碱可迅速分解,在PH9~10碱性溶液中可分解为几乎无毒的盐,可在酸性条件下还原。
黄qu霉素是泛指一些由真菌产生的强毒性致癌类物质,短期摄入高剂量(1㎎/kg体重)可导致急性中毒,常见发热、呕吐、黄疸等肝功能异常症状或肝坏死,长期低剂量(20微克/千克体重)暴露会显著增加肝癌、胃癌等患病风险,因其广泛存在于农作物与食物中,并对人体和动物危害巨大,故而建立快速、准确的检测方法对保障食品安全与公共健康具有重要意义。
本实验旨在通过固相酶联免疫吸附ELISA的原理,即酶联免疫法、定量测定样品中黄曲霉毒素B1的含量,为食品污染风险评估提供科学依据。
②玉米、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g)、微量移液器、甲醇、正己烷、二氯甲烷试剂
③取粉碎玉米样品2g,放于50ml离心管,加5ml样品提取液,振荡5分钟,室温4000转/分离心10分钟,结束后取0.5ml上清,加入0.5ml去离子水,混匀
④将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min,摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,并用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。
⑤将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
⑥揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干
⑦每孔加入底物液A(50µl),再加底物液B(50µl),振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟。
⑧每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,终止反应。
⑨用黄qu霉素测定仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成
经检测,该样品的黄曲霉毒素约为0.19ug/kg,满足GB 2761-2017标准。