饲料油脂乳制品霉菌素测定仪粮油食品检测

ST-2000A霉菌毒素测定仪是当前、酶联免疫等分析*的一种分析仪器。采用固相酶联免疫吸附ELISA的原理，即酶联免疫法，由本仪器与B1试剂盒二大件组成，能*、定量测定样品中B1的含量(如配其他试剂盒，可测其他毒素)，广泛应用于粮食、食品、饲料、油脂、乳制品、药物、饮料、酒等产品的B1及其他霉菌毒素的检测。

性能特点：饲料油脂乳制品霉菌素测定仪粮油食品检测饲料油脂乳制品霉菌素测定仪粮油食品检测

1. 显示操作：彩色液晶屏、可视话布板、显示整板信息、触摸屏操作

2、振板功能：3 级振板速度、时间 0-255 秒可调

3、工 作 站：专业的酶标仪软件，可存储 500 组程序、100000 个 样本结果，提供吸光度、线性方程、对数方程、二次方程、三次方程、吸光度百分比-浓度对数方程、样条函数、抑制率等丰富的计算模式

技术参数：

光 源：DC12V  22W  进口卤素灯

波长范围：400-900nm

滤 光 片：标配 405、450、492、630nm，其它波长可选配

读数范围：0-4.000Abs

分 辨 率：0.001Abs

示值误差：≤±0.01Abs

稳 定 性：≤±0.003Abs

重 复 性：≤0.3%

尺寸：400mm(L)*260mm(W)*200mm(H)      

1 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测谷物、饲料等样品中的B1（Aflatoxin B1，AFB1），试剂盒由预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂组成。检测时，加入标准品或样品溶液，样本中的B1和酶标板上预包被偶联抗原竞争抗B1抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光度值与其所含B1含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中

2 技术指标

2.1 试剂盒灵敏度：0.03ppb(ng/ml)

2.2 反应模式：25℃，30min～15min

2.3 检测下限：

谷物……………………………………0.15ppb

配合饲料………………………………0.3ppb

食用油、花生…………………………0.6ppb

酱类、麦类等饲料……………………0.3ppb

啤酒……………………………………0.3ppb

葡萄酒、酱油、醋……………………0.15ppb

2.4 交叉反应率：

B1…………………………100%

2.5 样本回收率：

谷物及配合饲料……………………85%±15%

花生…………………………………82±15%

食用油………………………………85±15%

酱类、麦类等饲料………………83±15%

啤酒………………………………84±15%

葡萄酒、酱油、醋………………87±15%

3 试剂盒组成

酶标板……………………………96孔

标准液（黑盖）：各1ml

0ppb、0.03ppb、0.06ppb、0.12ppb、0.24ppb、0.48ppb

高标准液：100ppb…………………1ml

酶标记物（红盖）…………………5.5ml

抗体工作液（蓝盖）………………5.5ml

底物液A（白盖）……………………6ml

底物液B（黑盖）……………………6ml

终止液（黄盖）………………………6ml

20X浓缩洗涤液（白盖）……………40ml

说明书………………………………1份

4 需要的器材和试剂

4.1 仪器：测定仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01g）

4.2 微量移液器：单道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道300µl

4.3 试剂：甲醇、正己烷、或甲烷

5 样本前处理

5.1 样本处理前须知：

实验器具必须洁净并使用一次性吸头，以避免污染干扰实验结果。

5.2 配液：

配液1：样品提取液

   70%甲醇，即V甲醇:V去离子水=7：3。

5.3 样本前处理步骤：

5.3.1 谷物处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加5ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

   样本稀释倍数：5    检测下限：0.15ppb

5.3.2 玉米皮、麦麸等吸水性强的样本处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加20ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；（对于毒素含量*的样本可用35%的甲醇稀释后再测。比如取2）中的混合液0.1ml加35%的甲醇0.9ml混匀，终样本稀释倍数为200，检测下限为6ppb。）

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：20    检测下限：0.6ppb

注：由于毒素在样本中的分布呈非均匀状态，取样时需多点取样充分混匀后再取2g进行试验。

5.3.3 配合饲料处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取0.5ml上清，加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10    检测下限：0.3ppb

5.3.4 食用油、花生、高油脂的饲料处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加8ml正己烷和10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）去除上层液体，取0.5ml下层液体加入0.5ml去离子水，混匀，再取混匀液体0.5ml加入0.5ml 35%甲醇，振荡30S；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：20    检测下限：0.6ppb

5.3.5 酱类、麦类、饼干、糕点等食品或调料，以及饲料浓缩料等饲料处理方法

1）称取2g粉碎样品于50ml离心管中，加10ml样品提取液，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取2ml上清，加入4ml），振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

3）转移上层液体到另一容器中，下层液留置备用，向上层液中再加入4ml甲烷），充分振荡混5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

4）去除上层液体，合并两次的下层液体并充分混匀；

5）取合并后的下层液体2ml于50-60℃氮气下吹干；

6）加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去离子水混匀；

7）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10    检测下限：0.3ppb

5.3.6 啤酒处理方法

1）将啤酒充分搅拌（去除CO2），取2ml啤酒样品，加入1ml蒸馏水，再加入7ml甲醇，振荡5分钟；

2）取混匀后的样品液0.5ml加入0.5ml去离子水，混匀；

3）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：10    检测下限：0.3ppb

5.3.7 葡萄酒、酱油、醋处理方法

1）取2ml样品，加入2ml蒸馏水，再加入10ml，振荡5分钟，室温4000转/分离心10分钟；

2）取下层液体1ml于50-60℃氮气下吹干；

3）加入0.5ml样品提取液充分溶解干燥物，再加入0.5ml去离子水，混匀；

5）取50μl进行分析。

样本稀释倍数：5    检测下限：0.15ppb

6 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃冷藏环境中取出，置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

实验开始前，用去离子水将20×浓缩洗涤液按20倍稀释成工作洗涤液。

6.1 编    号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

6.2 加样反应：加标准品或样本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶标记物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗体工作液，用盖板膜封板，轻轻振荡5秒混匀，25℃反应30分钟。

6.3 洗    涤：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用工作洗涤液250µl/孔充分洗涤5次，每次间隔30秒，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破）。

6.4 显    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，轻轻振荡5秒混匀，25℃避光显色15分钟。

6.5 终    止：每孔加入终止液50µl，轻轻振荡混匀，终止反应。

6.6 测吸光值：用测定仪于450nm处测定每孔吸光度值（建议用双波长450/630nm）。测定应在终止反应后10分钟内完成

6.7 ST-2000A自动测定仪自动完成测定，自动出结果。